亚洲天码中文字幕永久在线_午夜影院亚洲_久久久黄色视频无码_四虎欧美永久在线精品免费_一级情趣社区大地影视久久一区_在线欧美成人资源_国产91美女高潮在线观看_中文字幕三级片亚洲_日韩色色com亚洲免费日_无码国产精成人午夜视频

一、試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性 本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。 注意事項(xiàng) 1． 第一次使用前請(qǐng)先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及 時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入! 2． Buffer FP1、Buffer P3 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫 助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 3． 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋 緊蓋子。 二、原理簡介 針對(duì)多糖、多酚的去除成份，迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，不需 要氯仿抽提，徹底清除多糖、多酚和蛋白質(zhì)，基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下 選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心步驟, 進(jìn) 試劑盒組成 保存 50 次 （DP10011） 100 次 （DP10012） 200 次 （DP10013） Buffer FP1 室溫 30 ml 60 ml 120 ml Buffer P2 室溫 7 ml 14 ml 28 ml Buffer P3 室溫 50 ml 100 ml 200 ml RNase A -20℃ 200 μl 400 μl 800 μl 漂洗液 WB 室溫 15 ml 25ml 25mlX2 第一次使用前按說明加指定量乙醇 洗脫緩沖液 EB 室溫 15 ml 20 ml 40 ml 分離柱 A 室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè) 吸附柱 AC 室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè) 收集管（2ml） 室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè)  一步將多糖，多酚和細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液 將基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。 三、試劑盒特點(diǎn) 1． 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附 量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。 2． 不需要使用有毒的苯酚，氯仿等試劑。 3． 快速，簡捷，單個(gè)樣品操作一般可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。 4． 數(shù)種去多糖、多酚成份和多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280 典型 的比值達(dá) 1.7～1.9，長度可達(dá) 30Kb-50kb，可直接用于 PCR， Southern-blot 和各種酶切反應(yīng)。 四、注意事項(xiàng)（實(shí)驗(yàn)前必須首先閱讀這部分！） 1． 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13，000 rpm的 傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。 2． 開始實(shí)驗(yàn)前將需要水浴的物品先預(yù)熱到 65℃?zhèn)溆谩? 3． Buffer P3 中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染 皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理 鹽水沖洗。 4． 不同來源的植物組織材料中提取的DNA 的量會(huì)有差異，一般100mg 新鮮組織典型產(chǎn)量可達(dá)3-25μg。 5． 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA, 不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。 也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保 PH 大于 7.5, PH 過低影響洗脫效 率。用水洗脫 DNA 應(yīng)該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存，可 以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，PH 8.0），但 是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。 五、操作步驟 * 第一次使用前請(qǐng)先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇! * 將 Buffer P1 放置在 65℃預(yù)熱,使用前加入β-巰基乙醇到終濃度 0.2%。 1． 加熱 Buffer FP1 到 65℃預(yù)熱滅菌去離子水。 2． 取適量樣本在研缽中加入液氮充分碾磨成細(xì)粉。 3． 轉(zhuǎn)移細(xì)粉（植物新鮮組織 100 mg 或干重組織 30 mg）到一個(gè) 1.5ml 離心管，不要解凍，加入 550μl 65℃預(yù)熱 Buffer FP1 和 4μlRNase A 劇烈渦旋振蕩混勻 1 分鐘，65℃水浴 30 分鐘.期間激烈渦旋震蕩 3 次。 4． 加入 130μl 的 Buffer P2,充分混勻，12000rpm 離心 3 分鐘。 5． 小心吸取上清到一個(gè)分離柱 A，注意不要吸到界面物質(zhì)，12,000 rpm 離心 1 分鐘，收集下液。 6． 加入 1.5 倍體積的 Buffer P3 立刻輕柔渦旋，充分混勻。 7． 將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入一個(gè)吸附柱 AC 中， （吸附柱放入收集管中）12,000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的 廢液。 8． 加入 700μl 漂洗液 WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄掉廢液。 9． 加入 500μl 漂洗液 WB，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄掉廢液。 10．將吸附柱 AC 放回空收集管中，13,000 rpm 離心 3-5 分鐘，盡量除 去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。 11．取出吸附柱 AC，放入一個(gè)干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 50μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱）， 室 溫放置 3-5 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘收集 DNA。 洗脫體積越大，洗脫效率越高，可以 50μl 分兩次洗脫，可以提高洗脫效率。 12．DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長時(shí)間存放，可以放置在-20℃。 六、疑難解答（Trouble shooting） 出現(xiàn)的問題 可能的原因 建議解決方法 DNA產(chǎn)量低 處理材料過量或者裂解不 完全 使用適量的起始材料，充分研磨 或者勻漿 RNA 殘留 植物含量 RNA 太豐富 在 步 驟 3 后 裂 解 物 中 加 40μl RNase ， 也 可 以 多 加 到 80μl RNase。 未提取到 DNA 漂洗液 WB 中忘記加無水 乙醇 第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，在漂洗液 WB 中 加入指定量無水乙醇。 洗脫下來的 DNA 溶 液帶顏色或者膜上 有明顯的色素殘留 漂洗次數(shù)不夠 步驟 7 完成后，加 500μlWB 或 無水乙醇再漂洗一遍 起始材料太多過量 減少起始處理材料，不要過量 洗脫下來的DNA產(chǎn)量 低 離心柱殘留有較多乙醇或 者底部不慎重沾有乙醇 確保做了步驟 10，否則殘留乙醇 會(huì)影響洗脫效率。 使用了水或者其它非最佳 液體代替洗脫緩沖液 仔細(xì)閱讀步驟 10 和只使用洗脫緩 沖液 EB 洗脫。 A260吸光值異常偏高 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗 脫下來，干擾了吸光值 將洗脫的基因組 DNA 溶液 13， 000rpm 再離心一分鐘，小心取上 清使用。 DNA下游酶切不能 切開或者酶切不完 全 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗 脫下來，抑制了酶切反應(yīng) 將洗脫的基因組 DNA 溶液 13， 000rpm 再離心一分鐘，小心取上 清使用。 離心柱殘留有較多乙醇或 者底部不慎沾有乙醇抑制 了酶切反應(yīng) 確保做了步驟 10，然后空氣中晾 幾分鐘，讓殘留乙醇揮發(fā)。