亚洲天码中文字幕永久在线_午夜影院亚洲_久久久黄色视频无码_四虎欧美永久在线精品免费_一级情趣社区大地影视久久一区_在线欧美成人资源_国产91美女高潮在线观看_中文字幕三级片亚洲_日韩色色com亚洲免费日_无码国产精成人午夜视频

一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 50 次 （DP5301） 緩沖液 VB 室溫 5 ml 病毒結合液 室溫 30 ml 蛋白酶 K（20mg/ml） -20℃ 20mg Carrier RNA 室溫 300ul 去蛋白液 RE 室溫 30 ml 漂洗液 RW 4℃（一個月） -20℃（長期） 15 ml 第一次使用前請加入指定量乙醇 Wash buffer 室溫 10 ml 微量吸附柱 RA 室溫 50 個 收集管（2ml） 室溫 50 個 本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。 注意事項 1． 第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指定量乙醇(15ml RW 瓶加 60ml)，充分混勻， 加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入! 2． 為避免降低活性，方便運輸，提供 20mg 蛋白酶 K 為凍干粉狀，使用時可短暫離心 后，加入 1 毫升滅菌水溶解(20mg/ml 終濃度)。因為反復凍融可能會降低酶活性， 因此溶解后立即按照每次使用量(20 微升)分裝凍存，-20℃保存。 3． 避免試劑長時間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應及時 蓋緊蓋子。 二、原理簡介 獨特的結合液/蛋白酶 K 迅速裂解病毒和滅活病毒內(nèi)核酸酶，然后基因組 DNA 和 RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系 列快速的漂洗－離心的步驟, 抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等 雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 和 RNA 從硅基質(zhì)膜上洗 脫。 三、試劑盒特點 1． 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。 2． 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在 30 分鐘內(nèi)完成。 3． 多次柱漂洗確保高純度,無抑制性雜質(zhì)。 4． 本試劑盒用于從新鮮或者冷凍的血漿、血清、全血和其它無細胞體 液等樣品中提取病毒基因組 DNA 和 RNA,冷凍樣品不要反復凍融。所 得樣品可以直接用于 PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。 四、注意事項（實驗前必須首先閱讀這部分?。? 1． 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達到13，000 rpm的 傳統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。 2． 開始實驗前將需要的水浴先預熱到 70℃?zhèn)溆谩? 3． 為了最佳效果，最好使用新鮮液體標本并且避免反復凍融，否則會 使提取片段較小并嚴重降低產(chǎn)量。 五、操作步驟 * 第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指定量無水乙醇! 1. 取 200μl 含病毒的液體（血清、血漿、全血等），放入 1.5ml 離心管。 對如果液體起始量小于200μl，則用緩沖液VB補足到200μl。如果起始量介于 200μl-300μl之間，則后續(xù)操作需要按照比例增加試劑用量。對于組織樣本 應當先研磨，然后用200ul的緩沖液VB重懸，然后在加到病毒裂解液中。 2. 加入600μl 的病毒結合液，加入20μl蛋白酶K(20mg/ml)溶液，6ul的 核酸助沉劑，振蕩15秒，充分混勻，65℃水浴15分鐘，期間顛倒混 勻3-4次，直到溶液應清亮為止。 3. 加入100μl 無水乙醇，上下顛倒，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀 沉淀。 上述各操作步驟中適當力度充分混勻非常重要，混勻不充分嚴重降低產(chǎn)量。 4. 將上一步所得溶液和可能的絮狀沉淀分兩次加入一個吸附柱RA中， （吸附柱放入收集管中）10,000 rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢 液。 5. 加入600μl去蛋白液RE，12,000 rpm 離心30秒，棄廢液。 6. 加入 700μl 漂洗液 RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心 30 秒，棄掉廢液。 7. 將吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 分鐘，盡量除去 漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。 8. 取出吸附柱 RA，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加 30-50μl Wash buffer（Wash buffer 事先在 65-70℃水浴中預熱）， 室溫放置 2 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘。將得到的溶液重新加入 離心吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘。 9. DNA 可以存放在 2-8℃,如果要長時間存放，可以放置在-20℃。RNA 最好直接反轉(zhuǎn)錄成 CDNA 保存，或者 RNA 保存于-80°C。