產(chǎn)品展示
土壤基因組DNA快速提取試劑盒升級(jí)版(離心柱型)
產(chǎn)品編號(hào):DP4031/DP4032/DP4033
產(chǎn)品價(jià)格:¥ 1800/3200/6300
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
一、試劑盒組成、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性
試劑盒組成 保存
50 次
(DP4031)
100 次
(DP4032)
200 次
(DP4033)
抽提液 室溫 50 ml 100 ml 200 ml
蛋白酶 K
(溶液 A)
-20℃
10 mg 20 mg 20 mg×2
溶菌酶 -20℃ 2.5ml 5ml 10ml
溶液 B 室溫 5 ml 10 ml 20 ml
蛋白沉淀液 室溫 18 ml 36 ml 72 ml
溶液 C 4℃(一
個(gè)月)
-20℃
(長(zhǎng)期)
25 ml 50 ml 100 ml
洗脫緩沖液
EB 室溫 5 ml 10 ml 20 ml
純化柱 室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè)
收集管
(2ml)
室溫 50 個(gè) 100 個(gè) 200 個(gè)
本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。
注意事項(xiàng)
1. 溶液 B 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在 65℃水浴幾分鐘幫
助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化,
各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
3. 蛋白酶 K 加水溶解至終濃度為 20mg/ml。
二、原理簡(jiǎn)介
獨(dú)特的抽提和裂解體系迅速裂解細(xì)胞(壁)和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,
不需要借助玻璃珠破壁,有效保證了基因組 DNA 的完整性,經(jīng)過特殊
處理的純化柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸,極大的提高了 DNA 的純度,
用本試劑盒快速簡(jiǎn)便(1 小時(shí)內(nèi))提取基因組 DNA 純度極高,適合做
PCR 等下游反應(yīng)。
三、試劑盒特點(diǎn)
1. 經(jīng)過特殊處理的純化柱能有效的去除雜質(zhì)和腐殖酸。
2. 兼容性強(qiáng),適用于各種不同的土壤、糞便以及其他 soil.
3. 不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。
4. 快速,簡(jiǎn)捷,單個(gè)樣品操作一般可在 60 分鐘內(nèi)完成。
5. 高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá) 1.7~1.9,長(zhǎng)度可達(dá) 23kb
左右,可直接用于 PCR,Southern-blot 和各種酶切反應(yīng)。
四、 注意事項(xiàng)(實(shí)驗(yàn)前必須首先閱讀這部分!)
1.所有的離心步驟均可在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000 rpm
的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī),如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2.溶液 B 低溫容易形成沉淀,可在 65℃水浴幫助溶解。
五、操作步驟
a.準(zhǔn)確稱量 0.3--0.5g 的新鮮土到干凈的離心管中,加入 1ml 的抽
提液,加入 10μl 的蛋白酶 K 和 50μl 的溶菌酶,渦旋 1-2 分鐘,充
分混勻后 37℃水浴 15 分鐘(每隔 2-3 分鐘劇烈震蕩混勻)。
b.加入 100μl 溶液 B,渦旋 1-2 分鐘,充分混勻后 65℃水浴 10 分
鐘(每隔 2-3 分鐘劇烈震蕩混勻)。
c.10,000rpm 離心 10 分鐘取上清至新的 1.5ml 離心管。
d. 加入 1/3 體積的蛋白沉淀液,充分顛倒混勻。
e. 冰浴 8 分鐘,13,000rpm 離心 10 分鐘取上清。
f. 純化柱的處理:在純化柱中間加入 500μl 的溶液 C,靜置 1 分鐘,
10,000 rpm 離心過濾 30s,棄濾液。此步是為了增加柱子過濾雜質(zhì)
及腐殖酸的能力。
g. 將步驟 e 得到的上清液加入到處理過的純化柱中,低速離心
(4000rpm 左右)過濾,收集下濾液(下濾液含有 DNA)至新的 1.5ml
離心管中。
h. 準(zhǔn)確估計(jì)下濾液的體積,加入 0.6 倍體積的異丙醇,充分混勻,
13,000 rpm 離心 10 分鐘,小心倒掉上層懸液,倒扣離心管 2 分鐘晾
干,最后用 30μl 洗脫緩沖液 EB 溶解沉淀即可。(注:如果沉淀還
不是很干凈,還可以用 70%乙醇洗滌沉淀兩次,每次加入 1ml,最
后用洗脫緩沖液 EB 溶解)。