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一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 50 次 （DP7101） 100 次 （DP7102） 緩沖液 VB 室溫 30 ml 60 ml 結合液 CB 室溫 30 ml 60 ml 抑制物去除液 IR 室溫 25 ml 50 ml 漂洗液 WB 室溫 15 ml 25 ml 第一次使用前請加入指定量乙醇 洗脫緩沖液 EB 室溫 15 ml 15 ml 蛋白酶 K （僅 II 型提供） -20℃ 20mg 凍干粉 2x20mg 凍干粉 微量吸附柱 室溫 50 100 個 收集管（2ml） 室溫 50 100 個 本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。 注意: 1． 第一次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量乙醇,充分混勻，加入后請及時在方框 打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入! 2． 結合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現析出和沉淀，可以在 37℃水浴 幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。 3． 為避免降低活性，方便運輸，提供蛋白酶 K 為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后， 加入 400 微升或者 1 毫升滅菌水溶解(20mg/ml 終濃度)。因為反復凍融可能會降低酶 活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20 微升)分裝凍存，-20℃保存。 4． 避免試劑長時間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應及時蓋 緊蓋子。  二、原理簡介 獨特的結合液/蛋白酶 K 迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶，然后基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜， 再通過一系列快 速的漂洗－離心的步驟, 抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質 去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質膜上洗脫。 三、試劑盒特點 1． 不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。 2． 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在 30 分鐘內完成。 3． 多次柱漂洗確保高純度,無抑制性雜質。 4． 本試劑盒用于從新鮮或者冷凍骨頭樣品中提取基因組 DNA。所得樣 品可以直接用于 PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。 四、注意事項（實驗前必須首先閱讀這部分?。? 1． 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13，000 rpm的傳 統(tǒng)臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。 2． 開始實驗前將需要的水浴先預熱到 70℃?zhèn)溆谩? 3． 為了保證樣本不被食物或飲料污染，取樣前 30 分鐘內請勿進食和 飲水。 五、操作步驟 * 第一次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇! 1. 處理材料：將適量骨頭或軟骨用液氮或破碎儀研成粉末， 轉置于 2ml 離心管中， 加入 400μl 緩沖液 VB。 注意：如果需要去除 RNA，可加入 4μlRNaseA（100mg/ml）溶液（客戶自備， 目錄號：sp1001），振蕩 15 秒，室溫放置 5 分鐘。 2. 加入 20μl 蛋白酶 K 溶液，渦旋 10 秒混勻，65℃放置 10 分鐘，其間每 2 分鐘渦旋 混勻數次。 3. 13000rpm 離心取上清，轉入新的 1.5ml 離心管中，加入 400μl 結合液 CB，充分顛 倒混勻，70℃放置 10 分鐘，此時溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的液 滴。 注意 1: 加入緩沖液時可能會產生白色沉淀，一般 70℃放置時會消失，不會影 響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取量少和提 取出的不純。 ,4. 加 200μl 無水乙醇，充分顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。 注意：加入無水乙醇后可能會出現絮狀沉淀，但不影響 DNA 提取。 5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個微量吸附柱中（微量吸附柱放入收集管 中），12000rpm 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將微量吸附柱放回收集管中。 6. 向微量吸附柱中加入 500μl 抑制物去除液 IR，12000 rpm 離心 30 秒，倒掉收集管中 的廢液，將微量吸附柱放入收集管中。  7. 向微量吸附柱中加入 700μl 漂洗液 WB（使用前請先檢查是否加入無水乙醇），12000 rpm 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢液，將微量吸附柱放回收集管。 8. 向微量吸附柱中加入 500μl 漂洗液 WB，12000 rpm 離心 30 秒，倒掉收集管中的廢 液。 9. 將微量吸附柱放回收集管中，12000rpm 離心 2 分鐘，倒掉廢液。將微量吸附柱室 溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。 注意：這一步的目的是將微量吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會 影響后續(xù)的酶反應（酶切等）實驗。 10. 將微量吸附柱轉入一個干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加 20-50μl 洗脫 緩沖液 EB(洗脫緩沖液 EB 事先在 65-70℃預熱)，室溫放置 2-5 分鐘，12000rpm 離 心 2 分鐘。 注意：洗脫緩沖液體積不應少于 20ul，體積過小影響回收效率。 為增加基因組的得率，可將離心得到的溶液再加入微量吸附柱中，室溫放置 2 分 鐘，12000rpm 離心 2 分鐘。 洗脫液的對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應保證其 PH 值在 7.0-8.5 范 圍內（可以用將水的值調到此范圍），PH 值低于 7.0 會降低洗脫效率；且 DNA 產物應保持在-20℃，以防 DNA 降解。